Kit Deteksi Antigen Cepat Darah Utuh, Kit Uji Rumah Antigen 150-250ul

Dengan Instrumen Medis IVD untuk Melakukan Kit Tes Cepat Antibodi Penetralisir SARS-CoV-2

Kit Uji Fluerescent Antibodi Penetral & Uji Cepat Antibodi Penetral

Uji antibodi penetral pseudovirus dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya (5).Secara singkat, sel Vero diunggulkan di pelat 96-sumur untuk menghasilkan lapisan tunggal pada saat infeksi.Jumlah pretitrasi rVSV-SARS-Cov-2 [phCMV3-SARS-CoV-2 spike SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP (protein fluoresen hijau) dihasilkan dengan mentransfeksi sel HEK293T, ATCC CRL-3216] diinkubasi dengan plasma manusia yang diencerkan secara serial pada suhu 37°C selama 1 jam sebelum ditambahkan ke lapisan tunggal sel Vero (ATCC CCL-81) di pelat 96-sumur.Sel diinkubasi selama 12 hingga 16 jam pada 37 ° C dalam 5% CO2.Sel kemudian difiksasi dalam paraformaldehyde 4%, diwarnai dengan 1 g / ml Hoechst, dan dicitrakan menggunakan imager CellInsight CX5 untuk mengukur jumlah total sel yang mengekspresikan GFP.Infeksi dinormalisasi ke jumlah rata-rata sel yang terinfeksi rVSV-SARS-CoV-2 yang diinkubasi dengan plasma manusia normal.LOD ditetapkan sebagai <1:20 berdasarkan sampel plasma dari serangkaian subjek kontrol yang tidak terpapar.Sinyal negatif disetel ke 1:19.IC netralisasi50 (konsentrasi penghambatan median) titer dihitung menggunakan regresi One-Site Fit LogIC50 di GraphPad Prism 8.0.

Uji netralisasi berbasis fluoresensi throughput tinggi

Untuk mengisi kesenjangan untuk serodiagnosis COVID-19 dan evaluasi vaksin, kami mengembangkan uji berbasis fluoresensi yang secara cepat dan andal mengukur netralisasi reporter SARS-CoV-2 oleh antibodi dari spesimen pasien.Pengujian ini dibangun di atas mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 yang stabil di mana gen mNG direkayasa pada ORF7 dari genom virus (Gbr. 4b).1a)10.Urutan lengkap mNG SARS-CoV-2 dijelaskan pada Gambar Tambahan.1.Angka1bmenggambarkan diagram alur uji netralisasi reporter dalam format 96-sumur.Protokol pengujian dirinci dalam Metode Tambahan.Secara singkat, serum pasien diencerkan secara serial dan diinkubasi dengan virus reporter.Setelah inkubasi pada suhu 37°C selama 1 jam, sel Vero CC-81 (diunggulkan di piring 96-sumur) terinfeksi dengan campuran virus/serum pada multiplisitas infeksi (MOI) 0,5.Pada 16 jam pasca-infeksi, sel-sel mNG-positif dikuantifikasi menggunakan pembaca pencitraan konten tinggi (Gbr. 3d).1b).Perlu dicatat bahwa sel Vero CC-81, bukan sel Vero E6, dipilih untuk uji mNG untuk memungkinkan kuantifikasi akurat sel fluoresen.Enam puluh spesimen serum COVID-19 dari pasien yang dikonfirmasi RT-PCR dan 60 sampel serum non-COVID-19 (diarsipkan sebelum munculnya COVID-19) dianalisis menggunakan virus reporter.Untuk beberapa spesimen positif COVID-19, tersedia hari pengumpulan sampel setelah RT-PCR positif virus dan ditunjukkan pada TabelkamiTabel 1.1.Setelah infeksi virus reporter, sel-sel berubah menjadi hijau tanpa adanya serum (Gbr. 2).1c, panel bawah);sebaliknya, inkubasi virus reporter dengan serum pasien COVID-19 menurunkan jumlah sel fluoresen (panel atas).Kurva dosis-respons diperoleh antara jumlah sel fluoresen dan lipatan pengenceran serum (Gbr. 2).1 hari dan Gambar Tambahan. 2), yang memungkinkan penentuan lipatan pengenceran yang menetralkan 50% sel fluoresen (NT50).Uji reporter dengan cepat mendiagnosis 120 spesimen dalam 24 jam: semua 60 serum COVID-19 (spesimen 1–60) menunjukkan NT positif50 35 hingga 5711, dan semua 60 serum non-COVID-19 (spesimen 61-120) menunjukkan NT negatif50 dari <20 (Tabel 1).

Parameter: